蛋白酶抑制剂筛选：靶点分类、底物选择与常用试剂
丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸与金属蛋白酶四大类靶点的差异，常用模型底物与抑制剂类型，以及筛选实验设计要点。
蛋白酶是药物研发中最"高产"的靶点类别之一，从抗病毒到抗肿瘤，很多成功药物的作用机制都是让某个蛋白酶失去活性。筛选抑制剂因此成为常规工作，而不同类别的蛋白酶需要完全不同的实验设计。
一、四大类靶点
| 类别 | 活性中心特征 | 代表抑制剂类型 |
|---|---|---|
| 丝氨酸蛋白酶 | 催化三联体含丝氨酸 | PMSF、AEBSF（30827-99-7） |
| 半胱氨酸蛋白酶 | 活性中心含半胱氨酸 | E-64（66701-25-5）、碘乙酰胺 |
| 天冬氨酸蛋白酶 | 两个天冬氨酸协同 | 胃蛋白酶抑制剂类 |
| 金属蛋白酶 | 依赖锌离子催化 | EDTA、1,10-邻菲罗啉等螯合剂 |
二、底物与检测方式
- 显色底物：酶切后释放显色基团，可通过吸光度连续监测，成本低。
- 荧光底物：灵敏度更高，适合低酶量或高通量筛选。
- 荧光共振能量转移底物：两端分别标记荧光团与淬灭基团，被切开后产生信号，背景低。
- 凝胶电泳：以天然蛋白为底物，可直观显示水解程度，通量低但信息丰富。
三、实验设计要点
- 确定线性范围：先做酶量与时间的双因素试验，确保初速度条件成立，否则抑制率计算会失真。
- 对照设置：需设无酶对照、无抑制剂对照与溶剂对照，排除底物自水解与溶剂影响。
- 还原剂：半胱氨酸蛋白酶需要还原环境保持活性，常加入 DTT 或 β-巯基乙醇；但还原剂会与部分氧化型抑制剂反应。
- 金属离子：金属蛋白酶依赖锌，加入 EDTA（60-00-4）会失活，需注意缓冲液配伍。
四、常见干扰
待测化合物本身有颜色或荧光、溶解度差导致沉淀、以及聚集形成的假阳性，都是筛选中的常见问题。建议同时测定化合物对检测信号的直接干扰，并设置去垢剂对照排除聚集型假阳性。
五、采购建议
抑制剂筛选需要配套的酶、特异性底物、阳性对照抑制剂与缓冲组分。本站抑制剂/激动剂产品线提供 AEBSF、E-64、PMSF 等经典抑制剂与螯合剂类产品，如需荧光底物或特定靶点的酶制剂，可在详情页查询或提交需求。
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