转染试剂选型：脂质体、PEI、电转与病毒载体
2026-10-17 · 专业著作 · 百灵威授权转载
转染做不出来，返工的原因常常不在手法，而在路线一开始就选偏了。同样是往细胞里送核酸，送质粒、送小 RNA、送 mRNA 和送基因编辑组件，对载体的要求并不相同；贴壁细胞系、悬浮细胞、原代细胞和干细胞之间，能承受的处理强度也差得很远。选型没有标准答案，但有一套可以照着走的判断顺序，先把问题问对，比反复换试剂省事得多。
一、先定四件事：核酸、时长、细胞、通量
要送进去的是 DNA 还是 RNA，是瞬时表达还是要筛稳定株，细胞是容易养活的常规细胞系还是难转染的原代细胞，一次实验要处理几个样本、以后会不会放大。这四个答案基本就把候选范围缩小到一两类方法，也决定了你愿不愿意为某一款试剂去改培养条件、添设备或者走生物安全审批。反过来，先买试剂再想这些问题，往往要在中途推倒重来，浪费的不只是试剂，还有已经养好的细胞。
二、化学法：脂质体与 PEI
脂质体类依靠脂质与细胞膜融合把核酸递进胞内，操作步骤少、对贴壁细胞系友好，做质粒和小 RNA 的瞬时实验最常用。它对血清和抗生素比较敏感，复合物形成时的稀释顺序、混匀方式和孵育条件都要按说明书执行，随意改动常常就是效率波动的来源。细胞密度偏低或传代次数偏高时效果会明显变差，此时该做的是把细胞状态调回来，而不是一味加大试剂量。
聚乙烯亚胺（PEI）等聚合物与 DNA 形成复合物后被细胞内吞，相对成本低，用量容易按培养规模等比放大，因此在需要大量瞬时转染的悬浮培养里很常见。代价是细胞毒性更明显，对细胞密度和培养条件更挑，复合物比例稍有偏差就可能出现转染上不去或细胞成片脱落。它更适合工艺开发阶段，前提是把配比和细胞状态固定成一套可重复的流程，而不是每次临场调整。
三、物理法：电转
电转用瞬时电场在膜上打开可逆通道，对脂质体难以奏效的悬浮细胞、原代细胞和部分干细胞往往更有效，也方便一次处理较多细胞。问题在于细胞要承受一次物理打击，存活与恢复取决于细胞状态和缓冲体系，参数必须针对每种细胞单独摸。复苏不稳、代数偏高的样本做电转失败率明显偏高，所以它更适合状态稳定、能稳定供应的细胞，而不是勉强凑合的批次。做电转之前先确认细胞恢复到能正常传代的水平，再谈效率才有意义。
四、生物法：病毒载体
慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒等载体能把外源基因整合进基因组或长期留存，适合建立稳定表达株、感染原代细胞和做体内实验。代价是流程长：需要包装、滴度测定和生物安全审批，操作要在相应防护等级下完成，废弃物按实验室制度处理。逆转录病毒只感染分裂期细胞，慢病毒适用范围更宽；需要长期表达、又不想反复转染时，病毒路线通常更合适。如果只是短期验证一个基因的功能，化学法反复转染反而更轻便。
五、小结
一句话：先定核酸类型、表达时长、细胞和通量，再在化学、物理、生物三类里挑。
记住：能养活的细胞系优先脂质体，要放大看 PEI，难转染的看细胞状态选电转或病毒。
一、先定四件事：核酸、时长、细胞、通量
要送进去的是 DNA 还是 RNA，是瞬时表达还是要筛稳定株，细胞是容易养活的常规细胞系还是难转染的原代细胞，一次实验要处理几个样本、以后会不会放大。这四个答案基本就把候选范围缩小到一两类方法，也决定了你愿不愿意为某一款试剂去改培养条件、添设备或者走生物安全审批。反过来，先买试剂再想这些问题，往往要在中途推倒重来，浪费的不只是试剂，还有已经养好的细胞。
二、化学法：脂质体与 PEI
脂质体类依靠脂质与细胞膜融合把核酸递进胞内，操作步骤少、对贴壁细胞系友好，做质粒和小 RNA 的瞬时实验最常用。它对血清和抗生素比较敏感，复合物形成时的稀释顺序、混匀方式和孵育条件都要按说明书执行，随意改动常常就是效率波动的来源。细胞密度偏低或传代次数偏高时效果会明显变差，此时该做的是把细胞状态调回来，而不是一味加大试剂量。
聚乙烯亚胺（PEI）等聚合物与 DNA 形成复合物后被细胞内吞，相对成本低，用量容易按培养规模等比放大，因此在需要大量瞬时转染的悬浮培养里很常见。代价是细胞毒性更明显，对细胞密度和培养条件更挑，复合物比例稍有偏差就可能出现转染上不去或细胞成片脱落。它更适合工艺开发阶段，前提是把配比和细胞状态固定成一套可重复的流程，而不是每次临场调整。
三、物理法：电转
电转用瞬时电场在膜上打开可逆通道，对脂质体难以奏效的悬浮细胞、原代细胞和部分干细胞往往更有效，也方便一次处理较多细胞。问题在于细胞要承受一次物理打击，存活与恢复取决于细胞状态和缓冲体系，参数必须针对每种细胞单独摸。复苏不稳、代数偏高的样本做电转失败率明显偏高，所以它更适合状态稳定、能稳定供应的细胞，而不是勉强凑合的批次。做电转之前先确认细胞恢复到能正常传代的水平，再谈效率才有意义。
四、生物法：病毒载体
慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒等载体能把外源基因整合进基因组或长期留存，适合建立稳定表达株、感染原代细胞和做体内实验。代价是流程长：需要包装、滴度测定和生物安全审批，操作要在相应防护等级下完成，废弃物按实验室制度处理。逆转录病毒只感染分裂期细胞，慢病毒适用范围更宽；需要长期表达、又不想反复转染时，病毒路线通常更合适。如果只是短期验证一个基因的功能，化学法反复转染反而更轻便。
五、小结
一句话：先定核酸类型、表达时长、细胞和通量，再在化学、物理、生物三类里挑。
记住：能养活的细胞系优先脂质体，要放大看 PEI，难转染的看细胞状态选电转或病毒。
