蛋白 Marker 选型：预染、未染与宽范围
2026-10-17 · 专业著作 · 百灵威授权转载
跑完胶、转完膜，最后要回答的两个问题都离不开 Marker：目标条带到底多大，转膜有没有转干净。Marker 选错了，条带位置对不上、分子量报不准，甚至会把转膜失败误当成“样品里没有”。下面把预染、未染和宽范围几类 Marker 的分工与取舍讲清楚。
一、Marker 到底承担哪几件事
定位置：给目标条带一个分子量坐标，是最基本也最常用的作用。
看过程：预染 Marker 在电泳过程中就能看到分离情况，跑过头或没跑开一眼就能发现。
判转膜：转膜后膜上的 Marker 是否齐全、有没有偏移，是判断转膜效率和均匀性的直观依据。
做校准：需要精确报告分子量时，应以未染 Marker 的条带位置为准，而不是预染条带的表观位置。
二、预染 Marker：过程看得见，分子量要打折扣
原理：Marker 蛋白与染料共价结合，条带本身带颜色，不染色就能看见。
优点：电泳过程中可实时观察分离进程；转膜后膜上直接可见，判断转膜是否完全非常方便；也能帮助定位切膜和切胶的位置。
代价：染料和所带电荷会改变蛋白的迁移行为，标注值本身是表观分子量，与目标蛋白的实际分子量存在偏差，不宜用来精确计算未知蛋白的大小。
适合：日常 Western blot 的位置参考、转膜效率判断、多块胶之间的粗略对照。
三、未染 Marker：分子量更接近真实值
原理：由已知分子量的纯化蛋白组成，电泳后需与样品一起染色才可见。
优点：迁移行为更接近天然蛋白，标注值更接近真实分子量，适合需要准确判定条带大小、或目标条带正好落在判断边界上的情况。
局限：电泳和转膜过程中看不见；转膜后要靠可逆染色（如丽春红）或另做标记才能识别，操作上多一步。
适合：要报准确分子量的实验、发表级数据、以及需要严格比对的场合。
四、宽范围、窄范围与使用注意
覆盖原则：Marker 的范围要盖住目标蛋白和主要杂带，让目标条带落在中间区段，不要贴在最上端或最下端。
窄范围：条带分布更密、分辨更细，适合已知大小范围内的精确定位。
宽范围：适合初筛未知样品，或同一次电泳里要同时看大小差别很大的几个目标。
胶与体系：梯度胶、不同浓度的胶以及缓冲体系都会影响分离表现，选与当前胶体系匹配的 Marker 更可靠；胶的两侧各加一道，便于双向对照。
配套考虑：目标蛋白偏小，要确认 Marker 覆盖到它的下限；目标偏大，则要留意转膜效率和膜上 Marker 是否齐全。
使用注意：按说明书复溶和分装，避免反复冻融；上样前按说明处理，不要随意反复加热；不同批次的条带位置可能有细微差别，换批时先用已知样品验证。
记录习惯：把 Marker 的批次号和条带位置一并写进实验记录，日后复现或换批时能快速对应。
五、小结
一句话：预染用来看过程、判转膜，未染用来报分子量，宽范围负责初筛未知样品。
记住：表观位置不等于真实分子量，换批先验证，参数以说明书和当批 COA 为准。
一、Marker 到底承担哪几件事
定位置：给目标条带一个分子量坐标，是最基本也最常用的作用。
看过程：预染 Marker 在电泳过程中就能看到分离情况，跑过头或没跑开一眼就能发现。
判转膜：转膜后膜上的 Marker 是否齐全、有没有偏移，是判断转膜效率和均匀性的直观依据。
做校准：需要精确报告分子量时，应以未染 Marker 的条带位置为准，而不是预染条带的表观位置。
二、预染 Marker：过程看得见，分子量要打折扣
原理：Marker 蛋白与染料共价结合，条带本身带颜色，不染色就能看见。
优点：电泳过程中可实时观察分离进程；转膜后膜上直接可见，判断转膜是否完全非常方便；也能帮助定位切膜和切胶的位置。
代价：染料和所带电荷会改变蛋白的迁移行为，标注值本身是表观分子量，与目标蛋白的实际分子量存在偏差，不宜用来精确计算未知蛋白的大小。
适合：日常 Western blot 的位置参考、转膜效率判断、多块胶之间的粗略对照。
三、未染 Marker：分子量更接近真实值
原理：由已知分子量的纯化蛋白组成，电泳后需与样品一起染色才可见。
优点：迁移行为更接近天然蛋白，标注值更接近真实分子量，适合需要准确判定条带大小、或目标条带正好落在判断边界上的情况。
局限：电泳和转膜过程中看不见；转膜后要靠可逆染色（如丽春红）或另做标记才能识别，操作上多一步。
适合：要报准确分子量的实验、发表级数据、以及需要严格比对的场合。
四、宽范围、窄范围与使用注意
覆盖原则：Marker 的范围要盖住目标蛋白和主要杂带，让目标条带落在中间区段，不要贴在最上端或最下端。
窄范围：条带分布更密、分辨更细，适合已知大小范围内的精确定位。
宽范围：适合初筛未知样品，或同一次电泳里要同时看大小差别很大的几个目标。
胶与体系：梯度胶、不同浓度的胶以及缓冲体系都会影响分离表现，选与当前胶体系匹配的 Marker 更可靠；胶的两侧各加一道，便于双向对照。
配套考虑：目标蛋白偏小，要确认 Marker 覆盖到它的下限；目标偏大，则要留意转膜效率和膜上 Marker 是否齐全。
使用注意：按说明书复溶和分装，避免反复冻融；上样前按说明处理，不要随意反复加热；不同批次的条带位置可能有细微差别，换批时先用已知样品验证。
记录习惯：把 Marker 的批次号和条带位置一并写进实验记录，日后复现或换批时能快速对应。
五、小结
一句话：预染用来看过程、判转膜，未染用来报分子量，宽范围负责初筛未知样品。
记住：表观位置不等于真实分子量，换批先验证，参数以说明书和当批 COA 为准。
