DEPC水的制备与使用：RNA实验去RNase
2026-09-18 · 趣味化学 · 百灵威授权转载
RNA实验最怕RNase，DEPC水就是对付它的武器。DEPC水怎么配？怎么用？这篇文章一次讲清。
一、DEPC是什么
DEPC是焦碳酸二乙酯，一种强效RNase抑制剂，能把RNA酶灭活，是RNA实验里制备无酶水、处理耗材的经典试剂。
二、作用原理
DEPC能与RNase活性中心的组氨酸残基发生共价结合，让酶彻底失活。用DEPC处理过的水和耗材，RNase被灭掉，RNA样品才安全。
三、怎么制备
配浓度：取1毫升DEPC加入1升纯水，浓度就是0。1%，混匀。
孵育：37摄氏度孵育过夜，或室温放置数小时，让DEPC充分反应分解。
高压灭菌：121摄氏度高压灭菌15到20分钟，把残余DEPC分解掉，冷却后使用。
分装：灭菌后分装保存，标明日期，避免污染。
四、怎么使用
配试剂：用DEPC水配制RNA相关试剂、溶解RNA沉淀。
处理耗材：枪头、离心管用0。1%DEPC水浸泡过夜，再高压灭菌去除残留。
配样品：RNA样品溶解、稀释都用DEPC水，全程戴手套、换枪头。
五、注意事项
有毒：DEPC有毒、可疑致癌，操作戴手套，在通风处进行。
别碰Tris：DEPC会与Tris反应失效，DEPC水不能用来配Tris缓冲液，含Tris的溶液要用其他去RNase方法。
必须高压：残留DEPC会抑制体外转录、反转录等反应，DEPC处理后一定要高压灭菌分解干净。
现用现配：DEPC水开封后注意密封，长期使用定期更换，别让RNase再进来。
六、常见问题
问：DEPC水怎么配？
答：1毫升DEPC加1升纯水，混匀后37摄氏度孵育过夜，再121摄氏度高压灭菌15到20分钟，冷却后使用。
问：DEPC水的作用是什么？
答：DEPC灭活RNase，DEPC水用于配制RNA试剂、溶解RNA和处理耗材，保证RNA实验无酶环境。
问：DEPC水为什么要高压？
答：高压分解残余DEPC，防止残留抑制体外转录、反转录等下游反应。
问：DEPC水能配Tris缓冲液吗？
答：不能。DEPC会与Tris反应失效，Tris缓冲液要用其他去RNase方式处理。
问：DEPC水能存放多久？
答：灭菌分装后密封保存可用一段时间，注意防污染，开封后尽快用完，定期更换。
问：处理耗材要泡多久？
答：一般用0。1%DEPC水浸泡过夜，取出晾干后高压灭菌，再用于RNA实验。
七、总结
DEPC水的制备与使用，一句话：0。1%浓度、37度过夜、高压灭菌。使用记住：配RNA试剂、泡耗材、溶解样品。安全记住：戴手套、避Tris、必须高压。无酶环境，RNA才保得住。
一、DEPC是什么
DEPC是焦碳酸二乙酯，一种强效RNase抑制剂，能把RNA酶灭活，是RNA实验里制备无酶水、处理耗材的经典试剂。
二、作用原理
DEPC能与RNase活性中心的组氨酸残基发生共价结合，让酶彻底失活。用DEPC处理过的水和耗材，RNase被灭掉，RNA样品才安全。
三、怎么制备
配浓度：取1毫升DEPC加入1升纯水，浓度就是0。1%，混匀。
孵育：37摄氏度孵育过夜，或室温放置数小时，让DEPC充分反应分解。
高压灭菌：121摄氏度高压灭菌15到20分钟，把残余DEPC分解掉，冷却后使用。
分装：灭菌后分装保存，标明日期，避免污染。
四、怎么使用
配试剂：用DEPC水配制RNA相关试剂、溶解RNA沉淀。
处理耗材：枪头、离心管用0。1%DEPC水浸泡过夜，再高压灭菌去除残留。
配样品：RNA样品溶解、稀释都用DEPC水，全程戴手套、换枪头。
五、注意事项
有毒：DEPC有毒、可疑致癌，操作戴手套，在通风处进行。
别碰Tris：DEPC会与Tris反应失效，DEPC水不能用来配Tris缓冲液，含Tris的溶液要用其他去RNase方法。
必须高压：残留DEPC会抑制体外转录、反转录等反应，DEPC处理后一定要高压灭菌分解干净。
现用现配：DEPC水开封后注意密封，长期使用定期更换，别让RNase再进来。
六、常见问题
问：DEPC水怎么配？
答：1毫升DEPC加1升纯水，混匀后37摄氏度孵育过夜，再121摄氏度高压灭菌15到20分钟，冷却后使用。
问：DEPC水的作用是什么？
答：DEPC灭活RNase，DEPC水用于配制RNA试剂、溶解RNA和处理耗材，保证RNA实验无酶环境。
问：DEPC水为什么要高压？
答：高压分解残余DEPC，防止残留抑制体外转录、反转录等下游反应。
问：DEPC水能配Tris缓冲液吗？
答：不能。DEPC会与Tris反应失效，Tris缓冲液要用其他去RNase方式处理。
问：DEPC水能存放多久？
答：灭菌分装后密封保存可用一段时间，注意防污染，开封后尽快用完，定期更换。
问：处理耗材要泡多久？
答：一般用0。1%DEPC水浸泡过夜，取出晾干后高压灭菌，再用于RNA实验。
七、总结
DEPC水的制备与使用，一句话：0。1%浓度、37度过夜、高压灭菌。使用记住：配RNA试剂、泡耗材、溶解样品。安全记住：戴手套、避Tris、必须高压。无酶环境，RNA才保得住。
