胎牛血清(FBS)的使用、储存与灭活
2026-09-18 · 趣味化学 · 百灵威授权转载
养细胞的标配,就是胎牛血清。胎牛血清(FBS)怎么用?怎么储存?要不要灭活?这篇文章一次讲清。
一、FBS是什么
FBS是胎牛血清,富含生长因子、激素、蛋白和微量元素,是细胞培养基里最重要的添加成分,为细胞提供生长和增殖所需的营养。
二、怎么用
添加浓度:常用10%,按细胞类型可在5%到20%之间调,增殖快的细胞可以适当提高。
配培养基:基础培养基(DMEM、RPMI1640等)加10%FBS,再加双抗(青霉素、链霉素),混匀后使用。
过滤:市售血清多已过滤除菌,自己分装操作要在超净台里进行,避免污染。
稳定批次:换批号先做小规模测试,血清批间差异会影响细胞状态。
三、怎么储存
长期保存:零下20摄氏度或零下80摄氏度冷冻保存,可以放很久。
分装:按一次或几次用量分装,避免反复冻融,冻融次数越多活性损失越大。
解冻:4摄氏度过夜解冻最好,急着用可以37摄氏度水浴摇动快解,解冻后尽快用完。
短期冷藏:解冻后放4摄氏度短期存放,一般几周内用完,别放太久。
四、要不要灭活
灭活方法:热灭活是56摄氏度水浴30分钟,期间偶尔轻摇,让受热均匀。
灭活目的:主要是灭活补体,避免抗体介导的细胞杀伤,某些实验还希望降低潜在风险。
需要灭活的情况:免疫学实验、涉及补体的实验、部分原代细胞培养,按实验方案要求来。
不需要灭活的情况:大多数常规细胞培养(肿瘤细胞株、杂交瘤等)不需要灭活,过度加热会损失生长因子、降低促生长能力。
现在的主流做法:除非实验明确要求,常规培养不灭活,省事还保活性。
五、常见问题
问:胎牛血清怎么用?
答:加到基础培养基里,常用10%浓度,再加双抗,混匀使用,操作在超净台进行。
问:FBS怎么储存?
答:长期零下20摄氏度或零下80摄氏度冷冻,分装保存,4摄氏度解冻后几周内用完,避免反复冻融。
问:胎牛血清为什么要灭活?
答:灭活主要是灭活补体,用于免疫学等需要避开补体干扰的实验;常规培养不灭活也完全没问题。
问:血清解冻后有沉淀正常吗?
答:正常。少量沉淀多是纤维蛋白或脂蛋白,不影响大多数实验,介意就离心取上清。
问:灭活温度和时间是多少?
答:56摄氏度30分钟,水浴加热,期间摇匀,温度过高或时间过长会损伤血清。
问:血清颜色深浅不一样要紧吗?
答:颜色差异主要来自血红蛋白含量,不是质量问题,关键看批号检测报告和细胞生长情况。
六、总结
胎牛血清(FBS)的使用、储存与灭活,一句话:用10%、冻分装、别反复冻融。灭活记住:实验要求就56度30分钟,常规培养不用灭。血清用对,细胞才养得好。
一、FBS是什么
FBS是胎牛血清,富含生长因子、激素、蛋白和微量元素,是细胞培养基里最重要的添加成分,为细胞提供生长和增殖所需的营养。
二、怎么用
添加浓度:常用10%,按细胞类型可在5%到20%之间调,增殖快的细胞可以适当提高。
配培养基:基础培养基(DMEM、RPMI1640等)加10%FBS,再加双抗(青霉素、链霉素),混匀后使用。
过滤:市售血清多已过滤除菌,自己分装操作要在超净台里进行,避免污染。
稳定批次:换批号先做小规模测试,血清批间差异会影响细胞状态。
三、怎么储存
长期保存:零下20摄氏度或零下80摄氏度冷冻保存,可以放很久。
分装:按一次或几次用量分装,避免反复冻融,冻融次数越多活性损失越大。
解冻:4摄氏度过夜解冻最好,急着用可以37摄氏度水浴摇动快解,解冻后尽快用完。
短期冷藏:解冻后放4摄氏度短期存放,一般几周内用完,别放太久。
四、要不要灭活
灭活方法:热灭活是56摄氏度水浴30分钟,期间偶尔轻摇,让受热均匀。
灭活目的:主要是灭活补体,避免抗体介导的细胞杀伤,某些实验还希望降低潜在风险。
需要灭活的情况:免疫学实验、涉及补体的实验、部分原代细胞培养,按实验方案要求来。
不需要灭活的情况:大多数常规细胞培养(肿瘤细胞株、杂交瘤等)不需要灭活,过度加热会损失生长因子、降低促生长能力。
现在的主流做法:除非实验明确要求,常规培养不灭活,省事还保活性。
五、常见问题
问:胎牛血清怎么用?
答:加到基础培养基里,常用10%浓度,再加双抗,混匀使用,操作在超净台进行。
问:FBS怎么储存?
答:长期零下20摄氏度或零下80摄氏度冷冻,分装保存,4摄氏度解冻后几周内用完,避免反复冻融。
问:胎牛血清为什么要灭活?
答:灭活主要是灭活补体,用于免疫学等需要避开补体干扰的实验;常规培养不灭活也完全没问题。
问:血清解冻后有沉淀正常吗?
答:正常。少量沉淀多是纤维蛋白或脂蛋白,不影响大多数实验,介意就离心取上清。
问:灭活温度和时间是多少?
答:56摄氏度30分钟,水浴加热,期间摇匀,温度过高或时间过长会损伤血清。
问:血清颜色深浅不一样要紧吗?
答:颜色差异主要来自血红蛋白含量,不是质量问题,关键看批号检测报告和细胞生长情况。
六、总结
胎牛血清(FBS)的使用、储存与灭活,一句话:用10%、冻分装、别反复冻融。灭活记住:实验要求就56度30分钟,常规培养不用灭。血清用对,细胞才养得好。