DMEM与MEM培养基的区别与选择
2026-09-17 · 趣味化学 · 百灵威授权转载
裂解细胞提蛋白，最怕的就是蛋白被内源性酶降解。蛋白提取常用的蛋白酶抑制剂有哪些？使用浓度怎么定？这篇文章一次讲清。
一、为什么要加蛋白酶抑制剂
细胞破碎时，细胞内的蛋白酶被释放出来，会降解目标蛋白。提取液里加蛋白酶抑制剂，就是给蛋白上保险，保证提出来的蛋白完整、有活性。
二、常用抑制剂有哪些
按蛋白酶类型分：
丝氨酸蛋白酶抑制剂：PMSF、AEBSF、aprotinin（抑肽酶）、leupeptin（亮肽素）。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂：E-64、leupeptin。
天冬氨酸蛋白酶抑制剂：pepstatinA（胃蛋白酶抑制剂）。
金属蛋白酶抑制剂：EDTA、EGTA，靠螯合金属离子起作用。
三、各抑制剂的使用浓度
PMSF：终浓度常用1毫摩尔每升，母液配100毫摩尔每升，现配现用。
AEBSF：终浓度0。1到1毫摩尔每升，水溶性，比PMSF稳定。
aprotinin：终浓度常用1到2微克每毫升。
leupeptin：终浓度常用1到10微克每毫升。
pepstatinA：终浓度常用1到10微克每毫升，需要有机溶剂先溶解。
E-64：终浓度常用1到10微摩尔每升。
EDTA：终浓度常用1到5毫摩尔每升，抑制金属蛋白酶。
四、怎么溶解与保存
PMSF：溶于异丙醇、乙醇或DMSO，配成100毫摩尔每升母液，零下20摄氏度保存。
pepstatinA：溶于甲醇或DMSO，先配母液再稀释。
leupeptin、aprotinin、AEBSF：溶于水或缓冲液，分装冷冻。
cocktail：直接按说明书比例加到裂解液里，通常1比100，用前再加。
五、注意事项
PMSF要小心：PMSF有毒、有腐蚀性，操作戴手套，皮肤接触立即冲洗；它在水溶液中不稳定，最好临用前加，长时间提取要分次补加。
EDTA要权衡：加EDTA会螯合金属离子，如果下游要做金属离子依赖的实验（比如镍柱纯化），要提前想清楚。
全程低温：裂解和后续操作尽量在冰上进行，动作快，减少降解窗口。
现配现用：多数抑制剂在水里会慢慢失效，母液分装冷冻，用前按比例加。
六、常见问题
问：蛋白提取为什么一定要加蛋白酶抑制剂？
答：细胞破碎会释放内源性蛋白酶，不加抑制剂，目标蛋白会被降解，得率和完整性都受影响。
问：PMSF使用浓度是多少？
答：终浓度常用1毫摩尔每升，母液配100毫摩尔每升，溶于异丙醇或DMSO，现配现用。
问：蛋白酶抑制剂怎么选？
答：按实验对象定。不清楚目标蛋白情况就用cocktail（广谱），要抑制特定类型就选对应抑制剂，比如丝氨酸蛋白酶用PMSF，金属蛋白酶用EDTA。
问：PMSF在水里稳定吗？
答：不稳定，水溶液中会快速失效，要临用前加，长时间实验分次补加。
问：加了EDTA会影响下游实验吗？
答：会。EDTA螯合金属离子，镍柱亲和纯化、某些酶学实验要避开，用EGTA或调整方案。
问：cocktail怎么用？
答：按说明书比例加到裂解缓冲液中，通常1比100稀释，现配现用，避免反复冻融。
七、总结
蛋白提取常用的蛋白酶抑制剂，一句话：按蛋白酶类型配齐，浓度照标答来。PMSF记1毫摩尔，EDTA记1到5毫摩尔，微克级的记微克每毫升。冰上操作、现配现用，蛋白才保得住。
一、为什么要加蛋白酶抑制剂
细胞破碎时，细胞内的蛋白酶被释放出来，会降解目标蛋白。提取液里加蛋白酶抑制剂，就是给蛋白上保险，保证提出来的蛋白完整、有活性。
二、常用抑制剂有哪些
按蛋白酶类型分：
丝氨酸蛋白酶抑制剂：PMSF、AEBSF、aprotinin（抑肽酶）、leupeptin（亮肽素）。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂：E-64、leupeptin。
天冬氨酸蛋白酶抑制剂：pepstatinA（胃蛋白酶抑制剂）。
金属蛋白酶抑制剂：EDTA、EGTA，靠螯合金属离子起作用。
三、各抑制剂的使用浓度
PMSF：终浓度常用1毫摩尔每升，母液配100毫摩尔每升，现配现用。
AEBSF：终浓度0。1到1毫摩尔每升，水溶性，比PMSF稳定。
aprotinin：终浓度常用1到2微克每毫升。
leupeptin：终浓度常用1到10微克每毫升。
pepstatinA：终浓度常用1到10微克每毫升，需要有机溶剂先溶解。
E-64：终浓度常用1到10微摩尔每升。
EDTA：终浓度常用1到5毫摩尔每升，抑制金属蛋白酶。
四、怎么溶解与保存
PMSF：溶于异丙醇、乙醇或DMSO，配成100毫摩尔每升母液，零下20摄氏度保存。
pepstatinA：溶于甲醇或DMSO，先配母液再稀释。
leupeptin、aprotinin、AEBSF：溶于水或缓冲液，分装冷冻。
cocktail：直接按说明书比例加到裂解液里，通常1比100，用前再加。
五、注意事项
PMSF要小心：PMSF有毒、有腐蚀性，操作戴手套，皮肤接触立即冲洗；它在水溶液中不稳定，最好临用前加，长时间提取要分次补加。
EDTA要权衡：加EDTA会螯合金属离子，如果下游要做金属离子依赖的实验（比如镍柱纯化），要提前想清楚。
全程低温：裂解和后续操作尽量在冰上进行，动作快，减少降解窗口。
现配现用：多数抑制剂在水里会慢慢失效，母液分装冷冻，用前按比例加。
六、常见问题
问：蛋白提取为什么一定要加蛋白酶抑制剂？
答：细胞破碎会释放内源性蛋白酶，不加抑制剂，目标蛋白会被降解，得率和完整性都受影响。
问：PMSF使用浓度是多少？
答：终浓度常用1毫摩尔每升，母液配100毫摩尔每升，溶于异丙醇或DMSO，现配现用。
问：蛋白酶抑制剂怎么选？
答：按实验对象定。不清楚目标蛋白情况就用cocktail（广谱），要抑制特定类型就选对应抑制剂，比如丝氨酸蛋白酶用PMSF，金属蛋白酶用EDTA。
问：PMSF在水里稳定吗？
答：不稳定，水溶液中会快速失效，要临用前加，长时间实验分次补加。
问：加了EDTA会影响下游实验吗？
答：会。EDTA螯合金属离子，镍柱亲和纯化、某些酶学实验要避开，用EGTA或调整方案。
问：cocktail怎么用？
答：按说明书比例加到裂解缓冲液中，通常1比100稀释，现配现用，避免反复冻融。
七、总结
蛋白提取常用的蛋白酶抑制剂，一句话：按蛋白酶类型配齐，浓度照标答来。PMSF记1毫摩尔，EDTA记1到5毫摩尔，微克级的记微克每毫升。冰上操作、现配现用，蛋白才保得住。
