样品前处理固相萃取流程
2026-07-25 · 实验技术 · 百灵威授权转载
一、前期准备
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SPE 小柱选型
根据目标物极性、基质选择：反相 C18/C8、正相硅胶 / 氨基、离子交换、混合固相柱；
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试剂要求
洗脱、淋洗溶剂采用 HPLC 级，水为超纯水；缓冲盐用 GR 级，避免杂质干扰；
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样品预处理
液体样品：0.22/0.45μm 滤膜过滤，去除颗粒物；固体样品：提取、离心、过滤，得到澄清提取液；调节 pH、盐浓度，匹配固相吸附条件。
- 设备：固相萃取装置、真空泵、收集管、容量瓶。
二、五步标准操作（活化→平衡→上样→淋洗→洗脱）
1. 活化小柱
目的：润湿固相填料，打开吸附位点，去除柱内杂质。
- 反相柱（C18）：3~5 柱体积甲醇 / 乙腈过柱；
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正相柱：3~5 柱体积二氯甲烷、正己烷；
全程保持液面不流干，填料干涸会造成吸附失效。
2. 平衡（调节固相环境，匹配样品基质）
加入 3~5 柱体积与样品溶剂一致的溶液（纯水 / 低有机相缓冲液），置换高有机活化液，让固相适配样品极性。
3. 上样
将全部样品溶液缓慢过柱，控制流速 1~3 mL/min，流速过快会导致目标物穿透、回收率下降；
废液舍弃，目标物被固相填料吸附保留。
4. 淋洗（去除杂质、基质干扰物）
选用弱洗脱能力溶剂冲洗，只洗掉杂质，不洗脱目标物。
常见淋洗液：纯水、低比例有机相稀缓冲液、稀弱酸 / 弱碱；
淋洗后彻底抽干小柱，除去残留淋洗液，避免稀释洗脱液。
5. 洗脱（收集目标待测物）
加入少量强洗脱溶剂（高比例有机相），缓慢过柱，收集洗脱液；
洗脱液可旋蒸浓缩、氮气吹干，再用定容溶剂复溶，待仪器检测。
三、后续处理
- 浓缩：旋转蒸发、氮吹仪低温吹干，热敏物质水浴温度≤40℃；
- 定容：初始流动相溶解残渣，0.22μm 滤膜过滤后进样；
- 空白对照：同步做试剂空白 SPE，排查试剂、小柱污染。
四、关键注意事项
- 全程禁止填料干涸，活化、平衡、上样阶段一旦流干，吸附效率大幅降低，需重新活化；
- 流速严格控制，快速抽滤极易造成目标物穿透，回收率偏低；
- pH 调控是核心：离子交换、弱酸弱碱性物质必须调节 pH 保证吸附；
- 淋洗强度循序渐进，强度过高会把目标物提前冲掉；
- 小柱单次使用，不可重复回收填料，残留杂质交叉污染；
- 高油脂、色素基质可增加淋洗次数，减少基质效应；
- 废弃 SPE 柱归入有机危废处理。
五、常见问题解决
- 回收率低：填料干涸、流速太快、淋洗溶剂过强、pH 不匹配；
- 基线杂峰多：小柱未充分活化、试剂纯度低、淋洗不充分；
- 洗脱液浑浊：基质油脂未淋洗干净，需增加正己烷除油步骤。
