色谱柱维护保养方法
2026-07-25 · 实验技术 · 百灵威授权转载
一、上机前保护
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流动相匹配
新柱 / 长期闲置色谱柱，先查柱保存溶剂；反相 C18 多为甲醇 / 乙腈，正相柱多为正己烷、异丙醇。禁止高水相直接冲进纯有机保存的色谱柱，避免固定相塌陷。
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梯度过渡
溶剂极性差异大时设置过渡梯度，有机相与水相缓慢切换；含盐缓冲液不能直接 100% 有机相冲，防止盐结晶堵筛板。
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样品预处理
样品全部 0.22μm 滤膜过滤，高盐、高色素、蛋白样品必须固相萃取或沉淀；固体颗粒物、杂质会永久性划伤填料、堵塞柱头。
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pH 与温度控制
硅胶基质色谱柱通用 pH 2–8；pH＜2 硅羟基溶解，pH＞8 硅胶骨架水解；柱温稳定，避免冷热骤变。
二、实验过程中规范操作
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流速控制
色谱柱标准流速 1.0 mL/min，色谱柱内径越小流速越低；开机、停机缓慢升降流速，瞬间高压冲击会造成填料空洞、柱压飙升。
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缓冲盐使用要点
含盐流动相连续运行不超过 24h；高比例缓冲盐体系，每 4 小时用 10% 有机相冲洗 5 分钟，防止盐析出。
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压力监控
柱压突然升高：柱头堵塞；压力骤降：填料塌陷、柱头筛板穿孔；压力异常立即停机排查，不可强行冲柱。
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避免强腐蚀、强变性试剂
禁止高浓度强酸、强碱、高浓度三氟乙酸长时间过柱；离子对试剂做完必须充分冲洗。
三、实验结束冲洗流程（最关键）
1. 反相色谱柱（C18、C8）
1）含缓冲盐 / 离子对：先用 10% 有机相 + 纯水冲洗 10 柱体积，彻底冲净盐类；
2）再提升至 80%～100% 甲醇 / 乙腈冲洗 20 柱体积，带走残留样品、有机杂质；
3）长期保存：100% 甲醇或乙腈封存。
2. 正相色谱柱（硅胶、氨基、氰基）
1）流动相含水 / 醇，先用异丙醇过渡；
2）最终用正己烷或异丙醇封存，严禁纯水长时间冲洗，固定相水解失活。
3. 离子交换柱
低盐流动相冲洗除去缓冲盐，短期 20% 甲醇水保存，长期按说明书专用保存液封存，不可纯有机存放。
4. 手性色谱柱
严格按照说明书冲洗，禁止高浓度酸碱、四氢呋喃长时间冲洗，极易破坏手性拆分相。
四、短期、长期储存规范
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短期存放（1～7 天）
冲洗完成后，密封柱两端堵头，室温避光放置，避免阳光直射。
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长期存放（超过 7 天）
充分冲洗除尽样品、盐、缓冲剂，充满厂家指定保存溶剂；两端拧紧密封堵头，竖直放置在阴凉避光柜，温度 15–25℃。
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禁止行为
缓冲盐溶液中长期浸泡色谱柱；柱内干涸存放（填料不可逆损伤）；低温冷冻储存。
五、柱头污染、柱压升高修复手段
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轻度污染、基线漂移、杂峰多
低流速反向冲洗色谱柱（进出口调换），纯有机相低速冲洗 30–60min，去除柱头强保留杂质。
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柱头堵塞、压力偏高
拆卸柱头筛板，超声清洗筛板；柱头塌陷可补填同型号填料修复柱头。
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强保留杂质吸附严重
选用强洗脱溶剂（低浓度 THF）短时冲洗，不可长时间过柱。
六、日常使用禁忌
- 禁止超 pH、超温度、超高流速运行；
- 未过滤样品直接进样，造成永久性柱损伤；
- 缓冲盐做完不冲洗，盐结晶堵柱报废；
- 不同类型流动相直接切换，无过渡溶剂；
- 色谱柱闲置不封堵头，柱内溶剂挥发干柱；
- 强氧化剂、高浓度金属离子样品直接进柱。
七、台账与寿命管理
- 每根色谱柱单独记录：使用次数、样品类型、流动相体系、压力变化、异常情况；
- 性能判定：柱效下降 30%、拖尾严重、压力持续偏高、分离度不达标，判定报废；
- 旧柱降级使用：高杂质粗筛样品，不再用于精密定量、标准曲线检测。
八、特殊色谱柱补充要点
- 亲水色谱 HILIC：必须高有机相保存，纯水相浸泡会相分层失效；
- 质谱专用色谱柱：禁止含不挥发磷酸盐缓冲盐上机；
- 金属螯合色谱柱：避免高浓度重金属、EDTA 长期过柱。
