HPLC级 试剂配制方法
2026-07-25 · 实验技术 · 百灵威授权转载
一、前期准备要求
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器具要求
全部玻璃容器、容量瓶、烧杯、滤瓶先用水冲洗，再用甲醇 / 乙腈润洗 2～3 次，烘干备用；禁止残留普通 AR 试剂、金属离子、油污。配液全程使用一次性 PE 手套，禁止裸手接触内壁。
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水质要求
必须使用超纯水（18.2MΩ・cm），普通蒸馏水、去离子水不可用于 HPLC 流动相。
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环境
通风橱内配制，防尘，避免灰尘、纤维落入溶液产生颗粒。
二、有机相单溶剂（纯甲醇、乙腈 HPLC 级）
原装 HPLC 溶剂出厂已过滤、脱气，满足直接使用条件：
- 直接倒入流动相瓶即可上机；
- 若开封存放超过 1 周：0.22μm 有机系滤膜抽滤，超声脱气 10min 再使用；
- 禁止混合普通分析纯有机溶剂稀释。
三、水相流动相（缓冲盐、酸水体系）
1. 称量溶解
选用 GR/SP 级缓冲盐，不可用 AR 级（重金属杂质高，基线飘移）；精准称量后，加入超纯水搅拌至完全溶解。
2. pH 调节
色谱专用酸（磷酸、三氟乙酸 HPLC 级）、色谱纯氨水调 pH；
少量多次滴加，边搅拌边测 pH，避免局部酸碱浓度过高析出盐。
3. 过滤（关键步骤）
- 水相体系：0.22μm 水系滤膜减压抽滤，去除不溶微粒、细菌，防止堵塞色谱柱筛板；
- 含高浓度盐低温易结晶，过滤后观察无结晶再使用。
4. 脱气
抽滤后超声脱气 10～15min，除去溶解空气，避免泵内产生气泡导致压力波动、基线毛刺。
四、有机 - 水混合流动相（梯度 / 等度洗脱液）
两种配制顺序二选一：
- 先分别配好水相、有机相，上机仪器在线混合（推荐，现混现用，不易长菌、盐析出）；
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手动提前混合配制：
① 量取定量超纯水相，再加入 HPLC 级有机试剂；② 轻轻颠倒混匀，禁止剧烈摇晃产生大量气泡；③ 混合后0.22μm 混合滤膜整体抽滤，超声脱气 15min。注意：高盐水相与高比例有机相混合容易析出缓冲盐，需确认溶解度，出现浑浊则降低盐浓度。
五、含离子对试剂流动相
- 离子对试剂称量后先完全溶于水相，再调节 pH；
- 不可直接与纯有机相混合，极易析出；
- 配制后当天使用，4℃冷藏储存不超过 2 天，易降解污染色谱柱。
六、储存与有效期
- 纯有机 HPLC 溶剂：密封避光，1 个月内用完；
- 含水缓冲流动相：常温当日用完；4℃冷藏最多 2 天，水溶液易滋生微生物、产生杂质峰；
- 所有流动相使用棕色流动相瓶避光存放，防止光敏物质分解。
七、关键禁忌
- 严禁用分析纯有机溶剂代替 HPLC 级，会出现大量鬼峰、基线漂移、永久污染色谱柱；
- 过滤膜不可混用：水系膜不耐有机溶剂，有机膜不溶于水相；
- 流动相不可长期静置，水相放置超 2 天直接废弃；
- 配制全程避免引入灰尘、纸屑、纤维等固体颗粒。
八、上机前检查要点
- 溶液澄清无浑浊、无结晶；
- 超声后无细小气泡；
- 标签标注：流动相组成、pH、配制日期、有效期；
- 废液单独收集，有机废液、含水盐废液分开存放。
