碱裂解技术：质粒DNA纯化的科学基石与标准范式
2025-08-08 · 推荐产品 · 百灵威授权转载
碱裂解法作为分子生物学领域的经典技术，自诞生以来便以其高效、可靠的特性成为质粒DNA提取的黄金标准。这项技术的科学精髓在于巧妙利用DNA分子在不同pH环境下的特性差异：在碱性条件下，细菌细胞壁被破坏，染色体DNA与蛋白质发生不可逆变性的同时，环状质粒DNA因其独特的超螺旋结构得以保持完整。
| 步骤 | 操作细节 | 主要试剂/耗材 | 纯度/规格要求 |
|---|---|---|---|
| 细菌培养 | 37℃振荡培养12-16小时（含抗生素） | LB培养基 抗生素（如氨苄青霉素） | 微生物级 ≥99% (HPLC) |
| 菌体收集 | 离心（4℃, 12,000 rpm, 1 min） | 离心管（聚丙烯） | 无菌，DNase/RNase-free |
| 菌体重悬 | 加入Solution I（含RNase A），涡旋混匀 | Solution I | 现配现用 |
| 细胞裂解 | 加入Solution II，轻柔颠倒混匀（冰浴） | Solution II | 现配现用 |
| 中和沉淀 | 加入Solution III，冰浴5分钟，离心取上清 | Solution III | 预冷至4℃ |
| 杂质去除 | 可选：苯酚-氯仿抽提或柱纯化 | 苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1） 硅胶膜纯化柱（如Qiagen） | 分子生物学级 商业试剂盒 |
| DNA沉淀 | 上清+异丙醇/乙醇沉淀，-20℃静置 | 无水乙醇 异丙醇 | ≥99.7% ≥99.5% |
| DNA洗涤 | 70%乙醇洗涤，离心后晾干 | 70%乙醇（DEPC水配制） | 无RNase污染 |
| DNA溶解 | 溶于TE缓冲液或ddH₂O | TE缓冲液（pH 8.0） | DNase-free |
| 质粒检测 | 电泳、Nanodrop或Qubit定量 | 琼脂糖 EB（溴化乙锭）或替代染料 | 电泳级 超纯（致癌，需替代） |
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| LB medium LB培养基 | / | 2326877 |
| Ampicillin sodium salt 氨苄青霉素钠 | 69-52-3 | 947040 |
| Centrifuge tubes, 1.5 mL, amber, low retention, 500 tubes/pack 离心管 | / | 1496975 |
| Phenol, 99%, AR 苯酚 | 108-95-2 | 957630 危化品 |
| 3-Methyl-1-butanol, 99%, SuperDry, water≤30 ppm, J&KSeal 3-甲基-1-丁醇 | 123-51-3 | 930480 危化品 |
| Anhydrous ethanol, 99.7%, AR 无水乙醇 | 64-17-5 | 904283 危化品 |
| Isopropanol, 99.7%, AR 异丙醇 | 67-63-0 | 937211 危化品 |
| Ethanol, 99.7%, for analysis 乙醇 | 64-17-5 | 921327 危化品 |
| TE Buffer (100X) TE缓冲液 | / | 4255401 |
| Agarose, Electrophoresis Grade 琼脂糖 | 9012-36-6 | 917815 |
| Ethidium bromide, 95%, for bio 溴化乙啶 | 1239-45-8 | 904988 |
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| D-(+)-Glucose, 99%, for bio D-(+)-葡萄糖 | 50-99-7 | 936778促 |
| Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for analysis 三(羟甲基)氨基甲烷 | 77-86-1 | 992232 |
| Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade 乙二胺四乙酸 | 60-00-4 | 932641 |
| Sodium hydroxide, 96%, AR flaky 氢氧化钠 | 1310-73-2 | 935116 危化品 |
| Dodecyl sodium sulfate, 99%, for ion pair chromatography 十二烷基硫酸钠 | 151-21-3 | 953543新 |
| Potassium acetate, 99%, reagent grade 乙酸钾 | 127-08-2 | 222500 |
| Acetic acid, 99.5%, AR 乙酸 | 64-19-7 | 918109 危化品 |
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| Phenol, 99%, AR 苯酚 | 108-95-2 | 957630 危化品 |
| Chloroform-d, 99.8 atom%D, contains 0.03% v/v TMS 氘代氯仿 | 865-49-6 | 995425促 |
| Proteinase K, for bio, 30-40U/mg 蛋白酶 K | 39450-01-6 | 968706 |
| Ribonuclease A, ≥50 Kunitz units/mg 核糖核酸酶 A | 9001-99-4 | 967022 |
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for bio 三(羟甲基)氨基甲烷 | 77-86-1 | 966222促 |
| Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade 乙二胺四乙酸 | 60-00-4 | 932641 |
| 0.1mol/L PBS phosphate buffer solution 0.1mol/L PBS磷酸盐缓冲液 | / | 9456119 |
| Diethyl pyrocarbonate, 97%, for bio 焦碳酸二乙酯 | 1609-47-8 | 981187 |
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| Lysozyme, from chicken egg, ≥20,000 units/mg 溶菌酶 | 12650-88-3 | 302969 |
| Triton X-114 曲拉通 X-114 | 9036-19-5 | 928383 |
