免疫组化常见技术及相关试剂
2024-07-02 · 推荐产品 · 百灵威授权转载
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，通过化学反应使标记物显色，从而在细胞或组织切片中定位特定抗原的技术。 在免疫组化中，通常使用特异性抗体来检测组织样本中的目标蛋白质。
根据染色技术不同，免疫组化可分为酶联免疫组化（ELIHC）和荧光免疫组化（FLIHC）。
根据标记物不同，可分为直接免疫组化（直接使用标记有酶或荧光染料的抗体与抗原反应）和间接免疫组化（使用未标记的初级抗体与抗原反应，然后使用标记有酶或荧光染料的次级抗体与初级抗体结合）。
常用的PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法和CSA法等属于间接法。相对来说，直接法特异性高，敏感性低，而间接法则敏感性高，特异性低。
根据染色技术不同，免疫组化可分为酶联免疫组化（ELIHC）和荧光免疫组化（FLIHC）。
根据标记物不同，可分为直接免疫组化（直接使用标记有酶或荧光染料的抗体与抗原反应）和间接免疫组化（使用未标记的初级抗体与抗原反应，然后使用标记有酶或荧光染料的次级抗体与初级抗体结合）。
常用的PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法和CSA法等属于间接法。相对来说，直接法特异性高，敏感性低，而间接法则敏感性高，特异性低。
1、PAP法：过氧化物酶抗过氧化物酶法
通过制备具有高特异性的抗过氧化物酶抗体（简称抗酶抗体），并在抗酶抗体中加入过量的过氧化物酶（如辣根过氧化物酶HRP），使过氧化物酶充分结合在抗酶抗体上形成可溶性的PAP复合物。
图1 PAP法示意图
- 染色步骤
- （1）切片脱蜡水化，冰冻切片和细胞涂片不需脱蜡，固定后水洗。
- （2）3% H2O2水溶液处理10min。
- （3）PBS洗5min。
- （4）加非免疫动物血清孵育15min。
- （5）加第一抗体孵育60min。
- （6）PBS洗5min，3次。
- （7）加第二抗体孵育30min。
- （8）PBS洗5min，3次。
- （9）加PAP复合物孵育30min。
- （10）PBS洗5min，3次。
- （11）DAB-H2O2显色1～5min。
- （12）水洗，复染，常规脱水透明，封片。
2、APPAP法：碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法
APPAP法的原理、操作步骤等和PAP法基本相同，不同的是，在染色操作过程中不需要用H2O2消除内源性过氧化物酶，所用的显色剂为固蓝、固红或BCIP/NBT等。
图1 APAAP法示意图
3、ABC法：卵白素-生物素复合物法
利用卵白素和生物素高亲和力的生物学特性，用生物素与过氧化物酶（HRP）结合获得生物素化过氧化物酶，生物素化过氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物即ABC复合物。
图1 ABC法示意图
4、LSAB（或者SP）法：标记抗生物素蛋白链菌素-生物素法
和ABC法相似，不同处是在第二抗体后ABC法用ABC复合物而LSAB法用标记了过氧化物酶的抗生物素蛋白链菌素（streptavidin，SA）。SA的敏感性比ABC高，反应所需的时间比ABC短。
图1 LSAB（SP）法示意图
推荐产品
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| Phosphate buffered saline, 10×, BioUltra, pH7.2-7.4 PBS 缓冲液 | / | 1914020 |
| Bovine serum albumin, 98%, Australia origin, low IgG, low fatty acid 牛血清白蛋白 | 9048-46-8 | 109636 |
| Bovine serum albumin, 98%, New Zealand origin ,low endotoxin 牛血清白蛋白 | 9048-46-8 | 955593 |
| Xylenes, 99%, ACS reagent 二甲苯 | 1330-20-7 | 942377 危化品 |
| Xylenes, 99%, ACS reagent,500 ml 二甲苯 | 1330-20-7 | 932776 危化品 |
| Ethanol, 99.7%, reagent grade, anhydrous 乙醇 | 64-17-5 | 983081 危化品 |
| Trypsin, from bovine pancreas, 1:250 胰蛋白酶 | 9002-07-7 | 915246 |
| Xylenes, 99%, ACS reagent 二甲苯 | 1330-20-7 | 942377 危化品 |
| Trypsin, from porcine pancreas, 1:250 胰蛋白酶 | 9002-07-7 | 148407 |
| Trypsin, from porcine pancreas, 2500 units/mg 胰蛋白酶 | 9002-07-7 | 954773 |
| Sodium citrate, 99%, reagent grade, anhydrous 柠檬酸钠 | 68-04-2 | 439754 |
| Ethylenediaminetetraacetic acid, 99% 乙二胺四乙酸 | 60-00-4 | 477323 |
| Peroxidase, from horseradish, 200 units/mg 过氧化物酶 | 9003-99-0 | 202884 |
| Alkaline phosphatase, ≥2500 U/mg protein 碱性磷酸酯酶 | 9001-78-9 | 933347 |
| Hematoxylin, 90%, indicator 苏木精 | 517-28-2 | 266819 |
